Síndrome drepanocítico: Asociación de hemoglobina S Y &ß talasemia / Sickle cell syndrome. Association between hemoglobin S and ß thalassemia

El síndrome drepanocítico HbS/β talasemia responde a la herencia de tipo mendeliana en simultáneo de un alelo βs de la hemoglobina S (HbS) y un alelo de β talasemia. Vinculado fundamentalmente a individuos que comparten ascendencia africana y de países del Mediterráneo. La mutación responsable de la HbS es puntual, mientras que para la β talasemia existen más de 200 mutaciones que causan diferentes grados de deficiencia de síntesis de la cadena de β globina, lo cual justifica la heterogeneidad clínica y genética de este síndrome. Se presenta el caso clínico de un adulto joven de escasos recursos que consulta por dolores óseos de larga data. Registra hemogramas con anemia y marcada microcitosis. Se le realizó electroforesis de Hb detectándose un pico anómalo en posición de HbS y elevada fracción de HbA2. El resultado de la electroforesis de hemoglobina indica dos posibles alteraciones moleculares en simultáneo, por tal motivo se realizó el estudio molecular de las mutaciones más frecuentes en nuestra población de β talasemia y de la mutación puntual responsable de la hemoglobinopatía S. A partir de la clínica y datos del laboratorio bioquímico se diagnosticó el síndrome drepanocítico y se confirmó por biología molecular la portación de las mutaciones IVS-Int 110 G > A (β talasemia) y del codón 6 A > T (GAG→GTG: Glu→Val) responsable de la hemoglobinopatía S. Dado que es una enfermedad de alto impacto sanitario, es importante un adecuado asesoramiento genético a toda la familia.

Sickle cell syndrome HbS/β thalassemia is an inheritable mendelian type disease where two affected alleles are simultaneously present, one from HbS (βS) and the other from β thalassemia. That situation is mainly linked to individuals who share African and Mediterranean ancestors. The mutation responsible for HbS is a point mutation, whereas for β thalassemia, there are more than 200 mutations that cause different degrees of deficiency synthesis of β globin chain, which justifies the clinical and genetic heterogeneity of this syndrome. It is presented a clinical case of a young adult man with limited resources that consulted by longstanding bone pain. The patient presented anemia with a marked microcytosis. Hemoglobin electrophoresis was performed, an abnormal peak in position of HbS and high HbA2 fraction were detected. These last results indicated two possible molecular alterations simultaneously, for this reason the molecular study was performed looking for the most common β thalassemia mutations in our population and, the point mutation responsible for S hemoglobinopathy. Clinical data and biochemical laboratory allowed the diagnosis of sickle cell syndrome. The molecular study confirmed the syndrome carrying mutations IVS-I nt 110 G > A, responsible for β thalassemia and, codon 6 A > T (GAG → GTG: Glu → Val) responsible for S hemoglobinophaty. Since it is a disease of high health impact, it is important to provide genetic counseling to the whole family.

Estudio del ratio de FLT3-ITD como factor pronóstico en leucemias agudas mieloides: primeros casos estudiados en Uruguay / Analysis of the FLT3-ITD ratio as a prognostic factor in acute myeloid leukemias. First cases studied in Uruguay

Introducción: en los últimos años ha existido un avance significativo en el conocimiento biológico de la leucemia aguda mieloide (LAM) que se ha traducido en que el tratamiento de los pacientes afectados se realice guiado por el perfil citogenético y molecular. Las duplicaciones internas en tándem del gen FLT3 (FLT3-ITD) representan las mutaciones más frecuentes en LAM y confieren un mal pronóstico en pacientes con riesgo citogenético intermedio. Se ha reportado que la presencia de un ratio FLT3-ITD elevado (relación entre cantidad de alelo portador de ITD y de alelo salvaje) confiere un mayor pronóstico adverso. Objetivo: estandarizar una técnica, no disponible en Uruguay, para determinar el ratio de FLT3-ITD en pacientes portadores de LAM de riesgo citogenético intermedio. Discutir los primeros casos de LAM FLT3+ a los que se realizó el ratio. Material y método: para la detección de FLT3-ITD se amplificó un fragmento correspondiente a los exones 14 y 15 del gen en muestras de médula ósea al debut de la enfermedad. En los casos positivos se determinó el ratio de FLT3-ITD mediante análisis de fragmentos por electroforesis capilar. Resultados: en este trabajo mostramos la estandarización de un método para la determinación del ratio de FLT3-ITD y los primeros casos analizados en nuestro país. Se estudiaron 12 pacientes y se detectó la presencia de FLT3-ITD en tres de ellos. El ratio de FLT3-ITD encontrado fue en dos casos menor a 0,8 y en un caso mayor o igual a 0,8. Conclusiones: disponemos de una técnica de determinación del ratio de FLT3-ITD con importante valor pronóstico para pacientes portadores de LAM.

Abstract Introduction: In recent years, significant progress has been made in the biological knowledge of acute myeloid leukemia (AML), which has been reflected on treatment of affected patients being guided by cytogenetics and molecular profiling. FLT3 internal tandem duplications (FLT3/ITDs) represent the most frequent mutations in AML and confer a bad prognosis in patients with intermediate cytogenetic risk. It has been reported that the presence of a high FLT3-ITD ratio (relationship between number of ITD carrier allele and wild type allele). Objective: To standardize a technique, still not available in Uruguay, to determine the FLT3-ITD ratio in patients carriers of AML of intermediate cytogenetic risk. To discuss the first cases of AML FLT3+ who underwent ratio analysis. Methods: In order to identify FLT3-ITD, the fragment corresponding to exons 14 and 15 of the gene was amplified in bone marrow samples upon debut of the disease. In the cases it was positive, the FLT3-ITD ratio was determined by the analysis of fragments with capillary electrophoresis. Results: This study presented the standardization of a method to determine the FLT3-ITD ratio and the first cases analysed in our country. Twelve patients were studied and the presence of FLT3-ITD was detected in three of them. In two cases, the FLT3-ITD ratio found was below 0.8 and in one case it was greater than or equal to 0.8. Conclusions: We have a technique to determine the FLT3-ITD ratio with an important prognostic value for patients carriers of AML.

Resumo Introdução: nos últimos anos observou-se um avanço significativo do conhecimento biológico da leucemia aguda mieloide (LAM) que fez com que o tratamento destes pacientes seja orientado por seus perfis citogenético e molecular. As duplicações internas no tandem do gen FLT3 (FLT3-ITD) são as mutações mais frequentes na LAM e conferem um mal prognóstico em pacientes com risco citogenético intermediário. Foi descrito que uma proporção de FLT3-ITD elevada (relação entre a quantidade do alelo portador de ITD e do alelo selvagem) está vinculada com um maior prognóstico adverso. Objetivo: padronizar uma técnica, não disponível no Uruguai, para determinar a proporção de FLT3-ITD em pacientes portadores de LAM com risco citogenético intermediário. Discutir os primeiros casos de LAM FLT3+ cuja proporção foi calculada. Materiais e métodos: para a detecção de FLT3-ITD, foi realizada a ampliação de um fragmento correspondente aos exons 14 e 15 do gen em amostras de medula óssea no inicio da doença. Nos casos positivos, a proporção de FLT3-ITD foi determinada usando análise de fragmentos por eletroforese capilar. Resultados: neste trabalho mostramos a padronização de um método para a determinação da proporção de FLT3-ITD e os primeiros casos estudados no nosso país. Foram estudados 12 pacientes e a presença de FLT3-ITD foi determinada em 3. Em dois casos a proporção de FLT3-ITD era menor que 0,8 e em 1 caso maior ou igual a 0,8. Conclusões: contamos com uma técnica de determinação da proporção de FLT3-ITD com importante valor prognóstico para pacientes portadores de LAM.

Linfoma/leucemia t pediátrico con expresión del receptor Tyð / Pediatric t-lymphoma / leukemia with Tyð receptor expression

Los linfomas/leucemias Tyδ son poco frecuentes en la población pediátrica. Reportamos el caso de un niño de 5 años que presentó adenomegalias cervicales, supraclaviculares, axilares e inguinales induradas no dolorosas de 15 días de evolución. Hemograma de ingreso: Hto:44%; Hb:15.4g%; Leucocitos: 5900/mm3; Plaquetas: 262.000/mm3, Eritrosedimentación: 7mm. Serología negativa para Epstein-Barr, HIV, HCV, HBC. Radiografía de Tórax normal. La biopsia por anatomía patológica del ganglio mostró una infiltración por Linfoma Linfoblástico /Leucemia Linfoblástica Aguda T y por citometría de flujo una población de linfocitos TCR ɣδ+, con expresión de CD7++, CD3+, CD5+, CD2+, CD45+, CD4-, CD8-, CD38++, HLA-DR+ heter, CD71+. Además, se evaluaron las regiones variables δ del TCR por CF sugiriendo monoclonalidad para la Vδ3. La médula ósea mostró una infiltración del 30% de blastos con las mismas características inmunofenotípicas. El paciente recibió tratamiento para Leucemia Linfoblástica Aguda protocolo ALLIC BFM 2002. El día 15 del tratamiento presentó 5% de blastos en la médula ósea. Actualmente se encuentra en buen estado general y bajo tratamiento. Se presenta el caso por la baja frecuencia de la patología y el compromiso de médula ósea en un paciente con hemograma normal.

Tyδ lymphomas/leukemias are rare in infant population. Here we report the case of a 5 year old boy who presented cervical, supraclavicular, axillary, and inguinal indurated non-painful adenomegalias with a 15 day evolution. Blood count at admission: HCT: 44%; Hb:15.4g %; White Blood Cells: 5,900/ mm3; Platelets: 262,000/mm3, Eritrosedimentation: 7mm. Negative serology for Epstein-Barr, HIV, HCV, HBC. Normal chest X-ray. Biopsy by pathological anatomy of the node revealed infiltration by Lymphoblastic Lymphoma / Acute Lymphoblas- tic Leukemia T and by flow cyto- metry a population of TCR ɣδ+ lymphocytes, with CD7++, CD3+, CD5+, CD2+, CD45+, CD4-, CD8-, CD38++, HLA-DR+ heter, CD71+ expression. In addition, the variable regions δ of TCR where assessed by flow cytometry suggesting monoclonality for Vδ3. The bone marrow showed a 30% infiltration of blasts with the same immunophenotypical characteristics. The patient underwent treatment for Acute Lymphoblastic Leukemia protocol ALLIC BFM 2002. On the fifteenth day of treatment the patient presented 5% of blasts in his bone marrow. At present, his general condition is good and he is under treatment. This case is presented due to the rare occurrence of the pathology and the bone marrow involvement in a patient with normal blood count.

Leucemia promielocitica aguda: utilidad de la citometría de flujo en el diagnóstico / Acute promyelocytic leukemia: usefulness of flow cytometry in diagnosis

La Leucemia Promielocítica Aguda (LPA) requiere una rápida identificación ya que deben tomarse decisiones terapéuticas tempranas. Habitualmente el estudio morfológico es suficiente, pero la existencia de falsos positivos y negativos hace necesario buscar métodos más objetivos y rápidos que la confirmación molecular de la t(15;17) (PMLRARα) patognomónica. Objetivo: Evaluar la utilidad del inmunofenotipo por Citometría de Flujo (CF) como método diagnóstico temprano a LPA ya que presenta un patrón fenotípico aberrante característico. Materiales y Métodos: Se evaluaron 85 pacientes con diagnóstico presuntivo de Leucemia Mieloide Aguda, de los cuales 10 presentaron perfil inmunofenotipico de LPA. Procedimientos diagnósticos en el aspirado medular: 1) observación microscópica e histoquímica para mieloperoxidasa; 2) análisis multiparamétrico con anticuerpos monoclonales por CF, que cubrió el espectro de los distintos linajes. Los datos se adquirieron y analizaron en un FACScalibur (Becton Dickinson). Los parámetros hemostáticos evaluados fueron: Tiempo de Protrombina y Tiempo de Tromboplastina Parcial Activado, Fibrinógeno, Dímero D y Productos de Degradación del Fibrinógeno. Resultados: Las características fenotípicas de probable LPA M3 t(15,17) la presentaron 10 de los pacientes. El perfil inmunofenotípico tuvo correlación con la morfología en 6 casos; en 2 pacientes, la morfología no fue suficiente para clasificarlos como portadores de LMA M2 o M3. Pacientes (n=2), que presentaban inicialmente morfología monocítica, el diagnóstico definitivo fue M3v hipogranular. Patrón inmunofenotípico: única población de blastos, autofluorescencia, CD33++ homogéneo, expresión heterogénea de CD13, ausencia de expresión de HLA DR, patrón CD15/ CD34 definido. Conclusiones: el inmunofenotipo aporta gran valor para un screening rápido de LPA con rearreglo PML/RARα.

Acute Promyelocytic Leukemia (APL) requires rapid identification since early therapeutic decisions should be made. In general, morphological screening is enough. However, the existence of false positive and false negative results requires a search for methods that are more objective and rapid than molecular confirmation of pathognomonic t(15;17) (PMLRARa+). The objective of this study was to assess the usefulness of immu- nophenotype by means of Flow Cytometry (FC) as an early diag- nosis method for APL since it presents a characteristically aberrant phenotypical pattern. The study consisted in the assessment of 85 patients presu- mably with a diagnosis for Acute Myeloid Leukemia (AML). Among these patients, 10 presented an APL immunophenotypical profi- le. The diagnostic procedures performed in the medullar aspi- ration were the following: 1) microscopic and histochemical observation for myeloperoxidase; 2) multi-parameter analysis with monoclonal antibodies by means of FC, that covered the spectrum for the different strains. Data were acquired and analyzed in a FACScalibur (Becton Dickinson). The hemostatic parameters assessed were the following: Prothrombine Time and Partially Activated Thromboplastine Time, Fibrinogen, D Dimer, and Fibrinogen Degradation Products. The following results were obtained: 10 of the patients showed phenotypical characteristics of probable APL M3 t(15,17). The immunophenotypical profile showed correlation with the morphology in 6 cases; in 2 patients, the morphology was not enough to classify them as AML M2 or M3 carriers. For those patients (n=2), presenting monocytic morphology at the on-set, the final diagnosis was hypogranular M3v. The immunophenotypical pattern found was only one blast population, auto-fluorescence, homogeneous CD33++, heterogeneous CD13 expression, lack of expression of HLA DR, defined CD15/CD34 pattern. In conclusion, the immunophenotype is very useful for rapid screening of APL with PML/RAR rearrangement.